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        平臺

        概述

        博騰生物是一家端到端的基因與細胞治療CDMO服務,我們提供技術轉移,工藝開發,分析方法開發,cGMP生產,檢測服務和發現研究,包括專有技術許可,涵蓋不同的細胞和基因治療領域。

        工藝開發

        支持工藝開發所有階段

        博騰生物擁有知識和經驗豐富的工藝科學團隊,提供靈活、多選的工藝開發路線以滿足客戶在不同藥物開發階段的需求,覆蓋臨床前,臨床I期,II期和III期以及商業化階段。

        對于已經擁有工藝, 僅有臨床和商業階段生產需求的客戶,我們可以提供頭對頭的技術轉移服務并支持大規模生產。我們幫助在臨床III期的項目進行工藝表征和驗證(PPQ),以支持NDA和商業化生產。最后,對于處于臨床前和早期臨床研究階段的客戶,我們提供全流程工藝開發,優化和放大,及GMP生產支持。

        高效的技術轉移是藥物開發過程中的關鍵環節。在博騰生物,我們建立了明確的技術轉移流程,從原料,細胞庫,上下游工藝,原液/成品生產等差距分析開始,針對藥物的關鍵質量屬性(CQA)進行上下游生產和工藝設備及參數的分析與評估。我們的專業技術轉移團隊將進行深入評估,以確保分配適當的資源,平衡開發時間和成本,并在不影響質量的情況下實現按時交付。

        對于需要工藝開發支持的客戶項目,我們提供全方位的定制服務,包括工藝開發的縮小模型(Scale-down)、用于工藝優化的實驗設計(DOE),以及滿足不同生產規模的工藝放大(Scale-up)。我們還能夠通過以質量源于設計的原則(QbD),進行工藝表征和工藝驗證來支持BLA提交。

        對于需要工藝開發支持的客戶和項目,我們提供全方位的定制服務,包括工藝開發的縮小模型(Scale-down)、用于工藝優化的實驗設計(DOE)(見圖9),以及滿足不同生產規模的工藝放大(Scale-up)。我們還能夠通過以質量源于設計的原則(QbD),進行工藝表征和工藝驗證來支持NDA提交。

        分析研發

        在分析方法開發方面具有豐富的經驗

        與工藝開發團隊類似,分析研發團隊能夠對客戶轉移過來的分析方法進行優化或進行分析方法的完整開發工作。

        我們的分析研發團隊具有專業的分析研發技能,對細胞治療產品、病毒載體、溶瘤病毒、mRNA及質粒產品等在鑒別、含量、純度、活性及安全性等方面具有豐富的開發經驗,并已建立了200個以上的平臺分析方法。

        對于客戶已建立的分析方法,我們將在遵從客戶方案和符合法規要求的基礎上,對分析方法進行轉移和驗證/確認。

        平臺分析研發能力展示

        我們的分析研發實驗室配備了大量先進的儀器設備,分析研發團隊具有優秀的專業技能且在各領域具有豐富的分析方法開發經驗,如分子學、細胞分析、蛋白質組學、生物學、生物化學等;我們將DoE應用于分析方法的開發和優化中,建立了針對產品和工藝過程樣品的諸多方法,涵蓋活性類、鑒別類、含量與純度類、安全性等分析方法。

        不同產品分析研發能力展示

        超螺旋比例是質粒轉染有效性的一個關鍵指標。圖10展示了采用陰離子交換色譜檢測質粒超螺旋比例的色譜圖,圖中顯示開環和超螺旋峰可以良好的分離。

        圖10 代表超螺旋質粒的IEX-HPLC色譜圖(SC:超螺旋,OC:開環)

        根據法規要求,慢病毒產品中不應含有長度大于200bp的DNA片段。我們開了采用毛細管電泳儀檢測DNA片段大小的分析方法,如圖11所示。LV產品的圖譜與質控標準相比,可以看出LV產品中沒有200bp以上的DNA片段。

        圖11

        通過CE-LIF采集得到的LV產品的DNA片段分布電泳圖

        多種因素會影響CAR-T細胞產品及持久性,包括細胞的純度、功能、增殖和持久能力(如圖12)。我們的分析研發團隊可以為CAR-T細胞的工藝生產過程進行實時檢測和監控。我們開發了最先進的分析方法,這樣可以同時進行多個細胞表面標記物、細胞內、核蛋白的染色分析。

        圖12  A&B圖展示了通過FACS檢測的PBMC的免疫表型,C圖展示了NK細胞的免疫表型。在A和B圖中,通過對細胞表面marker(如CD3、CD56、CCR7、CD45RO等)染色去分析NK和PBMC細胞中的記憶T細胞亞群。圖C展示了NK細胞中穿孔素(perforin)的表達。perforin是自然殺傷細胞和殺傷性T細胞介導靶細胞裂解的的一個主要的效應分子。


        圖13 使用RTCA(實時細胞分析儀)設備來監測CAR-T細胞實時殺傷功能

        高空心率的AAV產品會降低產品的感染效率,同時帶來免疫原性

        因此,需要監控AAV產品的實心率以保證產品的有效性和安全性;圖14展示了采用SEC-MALS法(體積排阻色譜結合光散射儀、UV檢測器和RI檢測器)檢測病毒實心率的色譜圖。


        圖14 采用SEC-MALS法檢測AAV的實心率



        AAV病毒顆粒容易聚集并且產生聚集體,這些聚集體會導致AAV產品的感染效率降低,同時帶來安全風險,所以需要對AAV產品的粒徑分布進行檢測。

        我們的分析研發團隊采用Stunner設備開發建立了AAV病毒顆粒粒徑分布的分析方法,如圖15所示。


        圖15 采用Stunner設備檢測AAV的粒徑分布



        AAV的基因組滴度是用來確定產品劑量的重要方法,常用的檢測手段報告QPCR法和ddPCR法(如圖16A和B)。ddPCR是一種絕對定量方法,與QPCR相比,具有更好的準確度和精密度。

        我們為客戶提供ddPCR和QPCR的分析方法開發服務,以滿足客戶的不同需求。


        圖16A 采用ddPCR檢測AAV基因組滴度的檢出限為3拷貝,相對定量下限為20拷貝,相對定量上限為1E5拷貝



        圖16B 匯總了分別采用QPCR和ddPCR檢測11個樣品的基因組滴度結果的范圍和CV%變化情況

        Poly A尾長度影響產品的穩定性和功能。

        在博騰生物,我們已經開發了LC-MS(高效液相色譜與質譜聯用)的方法用于poly A尾的表征。

        圖17 Poly A尾的表征(LC-MS方法)

        cGMP生產

        滿足您從臨床前到商業階段的需求

        我們通過先進的16000平米GMP廠房來幫助客戶進行臨床試驗和商業化階段的基因與細胞治療藥物cGMP生產。

        我們的技術和生產能力得到了客戶的廣泛認可和重視,特別是端到端的支持能力,包括質粒生產,細胞庫/毒種庫建庫,原液 /成品生產和灌裝。我們提供non-GMP和GMP生產,以滿足客戶在臨床前或臨床和商業化階段的不同需求。我們的 GMP 車間符合BSL-2標準,按照不同潔凈等級管理(B級間+C級間),可進行質粒、病毒載體和細胞的生產。

        細胞庫 / 菌種庫建庫

        在開啟細胞和基因治療生產項目時,建立作為起始材料的高質量GMP主細胞庫和毒種庫至關重要。我們在細胞庫/菌種庫建方面的經驗能夠更好地為客戶服務。我們的團隊擅長細胞和菌種庫建庫、工藝表征、克隆篩選和GMP生產。

        我們對于不同細胞系生產系統都有著豐富經驗,包括HEK293/T,HeLa,SF9,Vero,A549等。我們提供從基于質粒的系統中從頭開始生產和回收傳染性病毒顆粒,以及遺傳表征、克隆優化和種子篩選,以初步優化病毒傳染性和滴度。

        原液和成品生產


        我們為病毒載體、細胞治療及mRNA原液和成品提供non-GMP和GMP生產服務。我們所有的創新生產平臺都符合國際監管機構的要求,包括FDA,EMA,NMPA等。我們還為提交 IND 和 NDA 提供 CMC 監管支持。

        在細胞治療方面,我們已經為自體和異體細胞治療平臺建立了穩健的GMP制造工藝。目前,我們有十幾個CAR-T細胞治療生產模塊。我們為non-GMP和GMP生產提供端到端支持,從質粒到慢病毒,再到細胞治療產品生產。

        對于基因治療,我們建立了創新和強大的AAV和慢病毒載體制造平臺。我們提供HEK293和SF9生產平臺,用于不同生產規模的non-GMP和GMP生產。我們擁有多達十條病毒載體生產線,使我們能夠根據客戶的需求定制工藝方法,包括貼壁和懸浮系統。

        我們還擁有專門的團隊和生產模塊用于溶瘤病毒療法的制造。我們的病毒制造能力和能力可以滿足臨床前、臨床和商業化階段溶瘤病毒療法的需求。我們新建立的mRNA GMP生產模塊使我們能夠為GMP mRNA生產提供端到端支持,包括質粒GMP制造和線性化,mRNA體外翻譯,上游生產種的加帽和加尾,下游生產中的多步驟純化以及研究級別的LNP包封和灌裝。

        我們擁有十幾個質量控制 (QC)實驗室以提供完整的 QC 檢測服務,用于所有基因、細胞和病毒載體治療的原液和成品的放行檢測。我們強大的質量控制能力對原液和成品生產至關重要,最終確?;颊甙踩闹委熤蝎@得最大收益。

        灌裝

        我們的加工生產線能夠每小時生產多達3000支,每批生產20000支。我們可以提供獨立的灌裝服務,或者作為整體服務的一部分提供灌裝服務。

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        兩種懸浮細胞慢病毒包裝系統的病毒滴度:
        A. 商業化慢病毒包裝系統,B. PTLV-SMART慢病毒包裝系統

        圖4

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        圖9

        DOE法優化AAV生產工藝參數。(此時最優參數:攪拌速度:70~140rpm;細胞密度:4.10E+06 cells/mL;模型預測結果:6.33E+11 vg/mL)

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        AAV 變體在文庫篩選過程中在不同組織中富集。將準備好的AAV 文庫并注射至宿主。兩周后,收集組織并分離病毒基因組用于 PacBio 測序。病毒基因組富集于不同的組織中。

        圖18

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        通過我們文庫篩選出的 AAV 變體,該病毒可包裝 6.1kb 的基因組。

        圖19

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        使用我們的HEK293T系統生產的慢病毒進行T細胞轉導。T細胞在不同的MO下感染慢病毒,通過FACS測量CAR-T細胞百分比。

        圖 20

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